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        如果液相色譜儀出現峰分叉會由什么原因導致的呢?

         更新時間:2021-07-23 點擊量:12889
          液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進行先分離,而后分析鑒定的儀器。在液相色譜儀的使用過程中,操作人員經常會遇到色譜峰出現分叉的情況。那么你知道色譜峰分叉是有幾個原因嗎?
          1色譜柱污染
          相色譜儀在開始時沒問題,在使用一段時間后出現色譜峰分叉的問題,可能是由于污染引起的。這時需要對色譜柱加強沖洗,即使用比方法流動相更強的溶劑沖洗色譜柱。
          2保護柱失效
          如果樣品基質比較臟,使用一段時間之后,發現的峰分叉或拖尾等問題,很有可能是保護柱失效造成的。一般粗略判斷標準,塔板數、壓力或分離度的改變超過 10%,就需要更換保護柱了。保護柱是消耗品,建議直接更換,不需要再生。
          3接頭連接不正確
          如果液相色譜儀色譜柱在使用過程中發現每個峰的峰形都出現問題,先考察是否有連接問題。
          管線可能太長或太短—這種情況可能導致滲漏或峰分叉/拖尾。如果管線太長,密封圈位置不當,將發生滲漏。如果管線推出的距離不夠,將會產生一段死空間,形成混合腔,導致柱外體積,使峰形變壞。
          4溶劑效應
          在反相 LC 中, 如使用 100% 有機溶劑或 100% 強溶劑,大體積進樣時,將使液相色譜儀色譜峰過早洗脫出色譜柱,導致峰變形。如需解決這個問題可以對分析物進行蒸發濃縮,從而減少進樣體積?;蛘哌M樣溶劑改為用水稀釋,與流動相更為兼容,即使進樣體積較大也不會出現峰變形。
          較早流出的峰或靠近溶劑前沿的峰更容易出現拖尾。在液相色譜中用溶于流動相的小體積進樣最為理想
          5樣品過載
          當進樣量超過柱子的容量,樣品峰會呈現分叉或拖尾,解決方案就是減少進樣量。這種問題一般在使用小體積色譜柱是表現更為明顯,所以色譜柱方法從常規250mm或150mm長色譜柱轉化到體積較小的快速分析柱時,進樣量要按照柱體積的減小的比例而減小。
          6色譜柱塌陷
          液相色譜儀由于柱塌陷引起的峰分叉,很難修復。如果流動相pH>7或在色譜柱pH耐受范圍臨界點附近長時間使用,是比較容易造成硅膠填料溶解塌陷。如果出現色譜柱塌陷,您會看到色譜圖中的每個峰峰形都會發生變化(峰拖尾、加寬或分叉),短時間內可以反方向運行,建議直接更換色譜柱。
          日常使用的過程中注意將溫度降低到 40 ℃以下,特別是使用高 pH 流動相時;使用高溫兼容色譜柱,如立體保護的硅膠柱、混合型柱、聚合物柱、氧化鋯柱等。使用特別適合在較高 pH 下操作的高覆蓋率或雙交聯固定相(比如,ZORBAX Extend-C18),或使用聚合物、混合型或氧化鋯反相柱。
          7柱前篩板部分堵塞
          液相色譜儀長期分析臟樣品,如果沒有保護柱或在線柱前過濾器,顆粒物和強吸附物很可能在柱入口篩板發生堵塞,同時伴隨著壓力升高,解決辦法一般是色譜柱反沖。1.8um粒徑的色譜柱盡量避免反沖。由于現在使用的是高效裝柱工藝,不建議更換色譜柱入口篩板,在許多色譜柱上也不可能更換。如果更換篩板,可能影響柱效。所以最好在色譜柱前安裝在線過濾器和保護柱。
          8色譜柱性能下降
          在您使用液相色譜儀色譜柱時,會用其分析各種目標物、使用各種流動相并分離不同的樣品基質,經過長時間的使用,色譜柱會受到這些物質的影響發生一些微妙的變化,從而引起峰分叉、拖尾或保留時間的改變。
          在使用新色譜柱時保留其測試樣品色譜圖非常重要,在使用一段時間后進行比較,就能發現性能上的變化。如果分離度下降導致不能進行良好定量,這根色譜柱就應該丟棄并更換了。
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