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        液相色譜儀的主要系統構成及特點

         更新時間:2011-07-01 點擊量:3524

           在很多的時候會不自覺的講液相色譜儀與氣相色譜儀進行比較,看它們各自的構成及其特點,這里介紹液相色譜儀的主要系統構成及特點,包括輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統等,并且各自有著與眾不同之處:

          *.分離系統,相對來說分離系統由色譜柱、連接管和恒溫器等部分構成,色譜柱一般長度為1050cm(需要兩根連用時,可在二者之間加一連接管),內徑為25mm,由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內裝有直徑為510μm粒度的固定相(由基質和固定液構成).固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成,它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點,加之其表面經過機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),或者用化學法偶聯各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。因此,這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。

          另外,固定相基質粒小,柱床極易達到均勻、致密狀態,極易降低渦流擴散效應?;|粒度小,微孔淺,樣品在微孔區內傳質短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據柱效理論分析,基質粒度小,塔板理論數N就越大。這也進一步證明基質粒度小,會提高分辨率的道理。再者,液相色譜儀的恒溫器可使溫度從室溫調到60C,通過改善傳質速度,縮短分析時間,就可增加層析柱的效率。

          第二.進樣系統,一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。

          第三.輸液系統,

          液相色譜儀的輸液系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。流動相貯存錯和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(即使僅有一個基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離。

          高壓泵的一般壓強為l4744X107Pa,流速可調且穩定,當高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴散效應,可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

          第四,就是數據處理系統該系統可對測試數據進行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

          第五.檢測系統液相色譜儀常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。

          1.紫外檢測器主要擁有這樣的特點:使用面廣(如蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);靈敏度高(檢測下限為10-10gml);線性范圍寬;對溫度和流速變化不敏感;可檢測梯度溶液洗脫的樣品。

          2.示差折光檢測器目前這一系統通用性強、操作簡單,但靈敏度低(檢測下限為10-7gml),流動相的變化會引起折光率的變化,因此,它既不適用于痕量分析,也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。

          3.熒光檢測器凡具有熒光的物質,在一定條件下,其發射光的熒光強度與物質的濃度成正比。因此,這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物(如多環芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質等)的測定,其靈敏度很高(檢測下限為10-1210-14gml),痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。

          通過以上的信息可以看出一個液相色譜儀的設計時很復雜的,在很多的方面需要協調性,并且分工合理,該液相色譜儀也是一款性能相當不錯的色譜儀!

          

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